人骨肉瘤细胞MG63培养指南
一、细胞培养条件
细胞名称：人骨肉瘤细胞MG63
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P
传代方法：建议初次传代比例为1:2，传代后每两天更换培养基。
备注：使用无菌离心管收集并保存原培养基，便于后续对比实验。如对比效果不理想，建议直接选择ag尊龙凯时提供的完全培养基。
二、细胞处理说明
在收到细胞后，应培养至良好状态，并将其灌满完全培养液，然后密封瓶口，以确保运输细胞的最佳效果。收到细胞后，可用75%酒精对整个细胞瓶进行喷洒消毒，然后在超净工作台上进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3至4小时以恢复细胞状态，然后进行处理。显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍率的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片为售后服务的重要依据。如果未提供照片，默认细胞状态良好。（建议在传代后使用一瓶的原完全培养基与一瓶自制的完全培养基进行对比培养，换液后松开瓶盖。）
三、细胞培养步骤
a. 细胞传代
若细胞汇合度未超过80%，请将培养瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml的完全培养基并放入37℃、5% CO2的孵箱中培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：
- 弃去培养上清，并用不含钙、镁离子的PBS对细胞进行1至2次洗涤。
- 添加0.25%的胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态。若细胞大部分变圆并脱落，迅速移回操作台，轻敲培养瓶后加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
- 轻轻吹打细胞使其完全脱落并吸出，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清后用1-2ml完全培养基重悬细胞。
- 按1:2的比例进行分瓶传代（可分为两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
b. 细胞冻存
- 细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，轻轻观察，待细胞回缩变圆后加入5ml的完全培养液以终止消化。轻吹使细胞脱落后，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
- 弃去上清，沉淀细胞后添加1ml的ag尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后将其加入冻存管中。
- 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，若后期需转入液氮罐，应先在-80℃冰箱存放24小时以上，然后再转入液氮罐中。
c. 细胞复苏
- 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直到冻存管内无晶体形成为止，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
- 将冻存管内的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
- 弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶中，并放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。
- 第二天，换用新鲜的完全培养基进行后续培养。
四、注意事项
由于某些细胞的粘附性较差，可能在运输过程中出现脱落，属正常现象。如果脱离细胞较多，可以将培养液收集至离心管中，并以1000RPM离心5分钟，收集沉淀进行过渡培养。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后消化1-2分钟，接着加入5ml完全培养基终止反应。再进行离心，弃去上清，添加1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
五、售后条款
1) 细胞问题的重发情况
- 如细胞在运输过程中出现丢失、瓶身破损或培养液严重泄漏等问题，可申请重发；
- 若细胞出现污染，请在收到产品48小时内提交真实实验结果，经核实后可重发；
- 常温发货的细胞在静置24小时后，或干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内大多数细胞未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片，可申请重发；
- 若干冰冻存发货的细胞复苏后24小时未存活，或常温发货的细胞静置4小时且未开封出现污染，均可申请重发；
- 有关细胞活性的问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，并使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实可重发；
- 收到细胞当天及接下来的二、三天内请拍照，若未告知，视为产品合格。若在4-7天内出现问题，需提供前三天的照片及出现问题时的照片，连同详细操作步骤与技术人员沟通，由技术人员判定是否可重发；
2) 不予重发的情况
- 客户自造成的细胞污染，不予重发；
- 客户不当操作致使细胞状态不佳，不予重发；
- 非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不良，不予重发；
- 若未提供细胞培养前三天的照片，则不予重发；
- 细胞在培养中经过其他处理的，不予重发；
- 收到后2天内未告知的，不予重发；
- 具体情况将另行审议。
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