### 培养条件

气相：95%空气 + 5%二氧化碳；温度：37℃ 。培养基为DMEM，添加10% FBS和1% P/S。A-673细胞来源于一名15岁女性的横纹肌肉瘤，能够在软琼脂中形成克隆，并在免疫抑制血清处理的小鼠中表现出肿瘤生成能力。该细胞株存在四个以上的标志性染色体表现，一个额外的F染色体和两个异常的B染色体。

### 细胞传代方法

首次传代建议比例为1:2。在细胞培养过程中，备齐相关培养基产品，有助于细胞的良好生长。收到细胞后，需进行处理，让其达到理想状态，然后将完全培养液充满容器并封好，以确保运输细胞的最佳效果。

接收细胞时，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后放入超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。

### 细胞观察与拍照

在显微镜下观察细胞生长状态，并拍摄不同放大倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将是重要的售后依据，若不提供照片则默认为收到状态良好。

### 细胞培养步骤

**A. 细胞传代**：如果细胞未超过80%汇合度，则将培养瓶中的完全培养液收集至离心管，保留5ml培养基于37℃、5% CO₂培养。若细胞密度超过80%，则可进行传代。贴壁细胞传代步骤如下：

• 1. 丢弃培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤1-2次。
• 2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞变圆脱落后，用5ml完全培养基终止消化。
• 3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清并用1-2ml完全培养基重悬。
• 4. 将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中，补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO₂培养箱中培养。

**B. 悬浮细胞传代**：

• 1. 采用半换液法，放置1小时后轻吸3ml培养基，再补充3ml完全培养基。如果培养基颜色变化缓慢，可以直接添加约500ul FBS，以此方式可连续传代3次左右，再进行离心传代以去除死细胞。
• 2. 如果需要分瓶，可以将细胞悬液移至离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，添加1-2ml培养液后重悬，再按1:2比例分瓶并补充6-8ml新的完全培养基。

### 细胞冻存与复苏

**C. 细胞冻存**：

• 1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，丢弃培养基并用PBS洗涤。
• 2. 向培养瓶中添加0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩后用5ml完全培养基终止消化。
• 3. 将悬液转移至离心管，1000RPM离心5分钟。
• 4. 加入1ml雅吉生物无血清冻存液，均匀混合后转移至冻存管，存放在-80℃冰箱中。

**D. 细胞复苏**：

• 1. 从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴解冻，擦拭外壁消毒。
• 2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管，1000RPM离心5分钟。
• 3. 弃去上清，重悬细胞后接种于T25培养瓶，放于37℃、5% CO₂培养箱中。
• 4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

### 注意事项

在运输过程中，有些细胞可能会脱落，这是正常现象。如有大量脱落，可将所有培养液收集至离心管，经过离心处理后，用胰酶进行消化。最后重悬于完全培养基中，按照比例进行分瓶传代，确保细胞的健康和活力。

在细胞培养和处理的过程中，我们建议使用ag尊龙凯时的产品，以保证细胞培养环境的可靠性和优化细胞的生长条件。